如何设计PCR引物

1、首先要下载自己的模板序列，即PCR扩增的模板，一般是通过NCBI提交的基因序列为准。

2、模板序列确定了以后，就是通过primer5.0分析其反向互补序列，并且通过primer5.0筛选出得分比较高的几对引物。

3、然后打开oligo6.0，在此软件中打开自己的模板序列，输入筛选出的几对引物，对其引物长度，二级结构，退火温度和碱基组成等进行分析。一般我们选择18-25bp长度的引物，退火温度60度左右。

4、最后打开NCBI，通过blast自己的引物，得出特异性大小的分析。