硫酸铵梯度沉淀蛋白质的方法和原理

 时间:2024-10-14 00:06:41

基本骒貉缭塄原理:硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离,是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质鲥陪光激竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来。

各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大,温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。

硫酸铵梯度沉淀蛋白质的方法和原理

方法:

以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸 铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为 33% — 50% 。

(一)配制饱和硫酸铵溶液( SAS )。

1.将 767g ( NH 4 ) 2 SO 4 边搅拌边慢慢加到 1 升 蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液( 4.1 mol/L, 25 ° C )。

2.其它不同饱和度铵溶液的配制。

(二)沉淀。

1.样品(如腹水) 20 000 ′ g 离心 30 min ,除去细胞碎片。

2.保留上清液并测量体积。

3.边搅拌边慢慢加入等体积的 SAS 到上清液中,终浓度为 1 : 1 。

4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时或搅拌过夜( 4 ° C ),使蛋白质充分沉淀。

以上内容参考:百度百科-硫酸铵

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