稀释噬菌体的方法

 时间:2024-10-12 11:17:41

1、首先,取含有0.9ml液体培养基的4 支试管分别注明10-3、10-*.10-5.10。用1ml无菌吸管吸0.1ml 10 2E.coli噬菌体人10 一的试管中,摇匀。另取一支1ml 无菌屑枯扔羟吸管从10 一试管内吸0.1ml 人10 ‘试管中,摇匀。往后依次类推,稀释至10-试管。

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2、然后,噬菌体液与菌液混合,取5 支无菌空试管分别标明10-‘.10-5.10 瀵鸦铙邮6、10-7和对照。用无菌吸管从10-3噬菌体稀释管吸0.1ml人10一的空试管内,用另支吸管从10一‘稀释管内吸0.1ml人10-5空试管内,后依次类推直至10-空试管。

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3、然后,将E.coli 菌液摇勻,用无菌吸管吸取0.9 ml 人对照试管内,再吸0.9ml人10 “试管内,摇匀,依次从最后一管加起,直至10 一‘试管,各管均加0.9 mlE.coli液,且分别摇匀。

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4、然后,在上层培养基内加入混合液, 取5管上层培养基并标明10‘.10 -5.10-6、10-7和对照,熔化后冷却到50C置水浴锅中保温。分别将4 管混合液和对照对号加入上层培养基试管内,并立即摇匀,在底层平板上倒人已接种的上层培养基。

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5、然后,将接种摇勻的上层培养基迅速对号倒人底层平板上,放平摇匀,使其铺满平板,凝固后于37C培养。

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6、最后,进行观察,将每一稀释度的噬菌斑形成单位(pfu)记录于实验报告表格内,并选取30~300个pfu 数的平板计算每毫升稀释的原液的噬菌体效价。

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