Western印迹技术之Bradford比色法

 时间:2024-10-14 10:14:20

1、用脱氧胆酸/三氯乙酸沉淀蛋白可排除甘油、去污剂、2-巯基乙醇、乙酸、硫酸铵、Tri衡痕贤伎s和一些碱性缓冲系统的干扰

2、分别在两组微量离心管中各加入0.5mg/ml牛笥苁嗥悍血清白蛋白(5,10,15和20µl),以0.15mmol/l NaCl补足至100µl,同时以两管100µl的0.15mmol/l NaCl作空白对照

3、每管各加入1ml考马斯亮蓝染料溶液,振荡混匀,室温放置2分钟

4、用25px光径的微量比色杯测A595,取A595吸光值对标准蛋白浓度作图,画标准曲线,并测量待测样品的A595

5、从BSA标准曲线中确定待测样品的浓度。测定10-100µg的蛋白质,要在较大试管中将染料溶液体积增大5倍进行。

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