dsRNA细胞转染实验步骤

 时间:2024-11-15 23:27:38

dsRNA细胞转染过程(24孔板)

1.提前1天细胞种植

1、贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为0.45ml。

2.转染过程

1、取1ug(50pmol)的dsRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25μl。

2、取1.5ul的Entranster-R4000,然后加入24ul无血清稀释液体,充分混匀,制成EntransterTM-R4000稀释液,终体积为25μl。室温静置5分钟。

3、将Entranster-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上)混合,室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

4、将50μl转染复合物滴加到有0.45ml全培养基(可含10%血清和抗生素)的细胞上,前后移动培养皿,混合均匀。

5、转染后6小时观察细胞状态,如状态良好可不必更换培养基,继续培养24-96小时得到结果。

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