1、首先，用枪头挑取单菌落，投入盛有10mlLB液体培养基的50ml试管中，在37摄氏度220r/min中培养14-16小时。
2、然后，用1%的种量接种于1000mlLB液体培养基中，在37摄氏度220r/min下，振摇2-3小时，当OD600值达到0.3-0.4时，停止培养。
3、然后，将菌液在冰上预冷半小时，随后将菌液分装到500ml预冷的离心杯中，在4摄氏度2500r/min下离心十分钟。
4、然后，弃上清液，离心杯中加入少量ddH2O，使沉淀悬浮后，再将水注满离心杯，在4摄氏度4000r/min下离心十分钟。
5、然后，弃上清液，加少量灭菌水，重悬菌体，再将水注满离心杯，在4摄氏度4000r/min，离心十分钟。
6、然后，弃上清液，往离心杯中加入少量10%甘油，重悬菌体，再加满10%甘油，于4摄氏度4000r/min，离心十分钟。
7、最后，弃上清液，每个离心杯中加入5ml的10%甘油，使沉淀悬浮后，将菌液以100微升/管分装与1.5ml的离心管中，在-80摄氏度冰箱中保存。
