痰液细胞提取

 时间:2024-10-11 19:32:08

1、估算并记录痰液样本体积。此处奉上工具,痰液就不放图了,怪恶心的。

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2、在痰液标本中加入4倍体积的 0.1%DTT溶液,2000rpm涡旋混匀,室温孵育1猱蝰逾鸾5min。期间要不断涡旋震荡,直至团块消失,痰液全部匀质化。

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3、取1000ul醺尬汰栎液化后的痰液,至洁净15ml离心管中,加入5ml 1×PBS涡旋混匀,500g离心5min。离心机如图,尽量选用水平离心机,这种离心机分离细胞效果好。

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4、弃上清,在沉淀中加入2ml 1×PBS缓冲液洗涤细胞,经过70um细胞滤网过滤,500g离心5min,弃上清,收集细胞沉淀。

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5、用1ml PBS重悬细胞,显微镜下观察,效果图如下,所得细胞可用于流式细胞术检测或其他实验检测。有些不标准的痰液,如泡沫痰,是得不到很多细胞的。白细胞形状为圆形,直径7-8um很好辨认。另外痰液中也可能含有鳞状上皮细胞,体积大,直径约50um,形状不规则。

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