1、涂片固定在干净的载玻片中央滴加一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成菌悬液并涂布成直径约1cm的薄层。
2、染色在固定过的涂片菌膜上滴加草酸铵结晶紫染液，染色液应完全覆盖整个菌膜，染色1min。
3、水洗染色到一定的时间，拿住玻片使之成450角，用细小的水流把多余的染料冲洗掉，被菌体吸附的染料则保留。
4、媒染加碘液覆盖涂面染1 min。在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性的化合物，可增加染料和细菌的亲和力。
5、水洗，用吸水纸吸去水分用细小的水流缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
6、脱色加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色， 20 s~30 s后再进行水洗，吸去水分。
7、复染蕃红染色液染色10 s后， 自来水冲洗。
8、干燥，镜检染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。
