如何验证引物的特异性

 时间:2024-10-14 21:01:02

1、打开浏览器,输入进入NCBI网站

如何验证引物的特异性

3、点击进入以下界面,在Primer Parameters里面输入自己已经设计好的引物序列,在此以病毒DNA序列为例子进行阐述,该引物为扩增EB病毒(人类疱疹病毒4型)DNA一段序列的引物。

如何验证引物的特异性

4、随后,在Primer Pair Specificity Checking Parameters里面的Databse中选择选项“Geno罪焐芡拂me(chromosomes from all organisms)”,由于举的例子是扩增病毒DNA的引物,用于扩增患者是否携带该病毒,所以要避免该引物扩增出人体DNA中的片段,从而在下面“Organism”里面选择“Homo sapiens”

如何验证引物的特异性

6、大概稍等一会儿,就会得到结果,结果页面如下图。本刳噪受刃条引物在扩增时可能会出现两天杂带,但是该段引物序列与人基因组序列还是存在碱基的不一致,所以也可能扩增不出来,另外产物的片段大小与目的片段大小差异较大,故本对引物的特异性很好!

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